一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系

基础培养基为1:1的MCDB105培养基（最终浓度为15g/L碳酸氢钠）与M199培养基（最终浓度为22g/L碳酸氢钠）的混合液，加入优质胎牛血清15%及双抗1%。

传代方法

首次传代建议采用1:2比例进行，传代后每2天更换培养液。请使用无菌离心管收集瓶内培养基，以此留作对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买新葡萄8883官网AMG的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好时，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，请使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认为收到状态良好。在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请将瓶盖稍微拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%的汇合度，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留出5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱继续培养。如果细胞密度超过80%，即可进行传代，其步骤如下：

弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，快速将其返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置并在显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞以促进脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清后，将沉淀的细胞加入1ml的新葡萄8883官网AMG无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存。如后期需转入液氮罐中，请先在-80℃冰箱中存放24小时以上，再转入液氮罐中。

四、细胞复苏

从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；弃去上清，沉淀的细胞用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

五、售后条款

1) 细胞出现问题的重发条件：

运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等问题，予以重发。
若收到的细胞存在污染，需在48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
常温发货的细胞静置24小时后，或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发。
干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后且未开封时发现污染，予以重发。
若收到的细胞活性出现问题，需在7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
收到细胞当天及接下来的2至3天需拍照，如3天未告知，则视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天的照片及操作详细步骤，并与技术人员沟通如由技术判断为我方责任，予以重发。

2) 不予以重发的情况：

客户造成细胞污染的，不予重发。
客户因不正当操作导致细胞状态不佳的，不予重发。
非新葡萄8883官网AMG推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不予重发。
细胞状态不佳，且未提供细胞培养前3天的照片的，不予重发。
培养期间经过其它处理的，不予重发。
收到细胞2天内未告知问题的，不予重发。
其他情况视具体情况而定。