新葡萄8883官网AMG提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书如下：

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁、悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议1:2传代，传代情况则需每2天更换培养基。

备注：悬浮细胞需离心收集，而贴壁细胞则按贴壁方式处理。使用无菌离心管收集培养基，并留作过渡培养。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，为确保细胞处于良好状态，需灌满完全培养液并封好瓶口，以此为最佳运输方式。在处理前，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内严格执行无菌操作。随后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后再进行后续处理。

使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数的拍照保存（建议保留40x、100x、200x的照片各一张）。前三天的照片为重要售后依据，未提供照片则默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。更换培养基时，请将瓶盖拧松。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若未超过80%汇合度，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，并留5ml完全培养基，随后放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代。对于贴壁细胞，请参考以下步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞大部分变圆并脱落，立即在操作台轻敲培养瓶，加入5ml以上培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保完全脱落，之后吸出悬液，转移至15ml离心管中并在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞形态，待其回缩后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使之脱落，转移至15ml离心管中并在1000RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱中，如需转入液氮罐中，请于-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c、细胞复苏

1. 取出液氮中的冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱中培养，第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能因贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。如脱落情况较为严重，可以将培养瓶中所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清以作为过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后用5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

新葡萄8883官网AMG在售后处理方面，细胞出现问题可重发的情况包括：运输中遇到的各种问题（如细胞丢失、瓶身破损等）、细胞污染问题、干冰冷藏和常温发货后细胞存活率低等需及时反馈。另外，若客户造成细胞污染或操作不当导致细胞状态不佳的情况，将不予以重发。

同时，客户在定期检查细胞状态时请确保提供相关证据照片，以便我们更好地进行售后服务。